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重复正交试验的方差分析-体外诊断试剂工艺及反应体系研究2024-05-15 03:37:15

在实际工作中，常常需要同时考察3个或3个以上的试验因素，若进行全面试验，则试验的规模将很大，往往因试验条件的限制而难于实施。 正交设计是安排多因素试验、寻求最优水平组合的一种高效率试验设计方法。 正交设计是利用正交表来安排多因素试验、分析试验结果的一种设计方法。它从多因素试验的全部水平组合中挑选部分有代表性的水平组合进行试验，通过对这部分试验结果的分析了解全面试验的情况，找出最优水平组合。 本例以PCR(聚合酶链式反应)为例，介绍正交试验的方差分析在体外诊断试剂反应体系研究中的应用，在PCR(聚合酶链式反应)中，模板、MgCl2、引物、dNTP是反应的重要条件。 1 模板 高质量的模板（DNA 或cDNA）是 PCR 成功的保证，原料中不能混有任何蛋白酶、核酸酶、DNA 聚合酶的抑制剂和能结合DNA 的蛋白质。有人报道，在反应前使用多种限制性酶对样品中除模板以外的其他核酸进行消化，能大大增加反应的特异性和产量。模板的量与循环数要匹配，如果循环数一定，模板的量太少，会出现阴性结果或条带很弱；模板的量太多，则会出现条带弥散，模糊不清。 2 MgCl2 Mg2+是Taq DNA 聚合酶活性所必需的，对反应有显著影响。浓度过低，酶的活力降低浓度过高，则催化非特异性扩增。PCR 混合物中DNA 模板、引物和 dNTP的磷酸基因均可与Mg2+ 结合，而Taq 酶需要的是游离的Mg2+，因此，加入量要比dNTP 的浓度高0.2~2.5mmol。当dNTP浓度为 200μmol/ 时，M g2+为1.5mmol 较合适。若样品中有 EDTA 或其它螯合物进，可适当增加M g2+ 浓度。 3 引物 通过微机帮助有利于成功地设计引物，合适的引物既能增加特异性又能增加敏感性。 引物 5'端可以进行修饰而不影响扩增，3'端一般不能进行任何修饰。在一定范围内，引物浓度升高，反应特异性降低；反之，特异性增加。通常，引物浓度为 400μmolL 就足够了，浓度过高，凝胶电泳时会出现引物条带。 4 dNTP 浓度 浓度过高会产生错误掺入，而浓度过低会降低产量，常用浓度为 200μmolL。反复冻融使之活性降低，甚至出现假阴性结果。 为寻找PCR反应的最优条件，安排四因素四水平正交试验。试验设计如下：编辑 正交试验因素水平表
编辑切换为居中
添加图片注释，不超过 140 字（可选） 为满足不同的试验需求，需选择合适的正交试验表，常见的正交试验表可查阅相关文献或书籍。 进一步分析计算公式如下：编辑 正交试验方差分析计算公式 方差分析结果如下：编辑 添加图片注释，不超过 140 字（可选） 重复试验时，用MSe=SSe/dfe检验各因素及其交互作用的显著性。当正交表各列都已排满时（无前面表格中的“空列”），可用MSe=SSe2/dfe2来检验显著性。 由方差分析表可知，四个因素的作用高度显著。因素作用的主次顺序为A、B、C、D。通过比较Kij值，可以确定各因素的最优水平为A3、B4、C3、D3，最优水平组合A3B4C3D3。 将因素改为工艺相关的条件，即可用上述正交实验表进行体外诊断试剂的工艺研究。 设计好的excel计算模板如下：在试验结果处录入数据即可。 体外诊断试剂工艺及反应体系研究：重复正交试验的方差分析(示例PCR聚合酶链式反应)

标签: 方差分析法分析试验结果Excel表 

作者:langhun | 分类:excel表格教程 | 浏览:56 | 评论:0

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