讲老鼠实验方法，解神经科学知识。
讲鼠解经为您讲解实验知识。走进神经科学，
点个关注吧！
获得性无助实验方法步骤
获得性无助实验 (learned helplessness test,LHT) 是指当动物接受连续无法控制或 预知的厌恶性刺激(电击)后，将其放在可以逃避电击的环境中时，呈现出逃避行为 欠缺的现象，同时还伴有体重减轻、运动性活动减少、攻击性降低等行为改变。获得性无助实验源于一项关于巴甫洛夫条件性恐惧反应的研究，发展至今已有50多年。最初是发现在束缚状态下的狗在铃声响起后，后爪会受到一段时间温和电击刺激。24h后 将狗放入同样的测试箱中测试，测试箱设定为铃声发出时，动物跳跃箱中障碍可终止 电击。根据预想，动物听到铃声将引起条件恐惧从而促进动物跳跃障碍的反应，但结果却是狗逃避失败，消极等待电击发生， Seligman等将此现象定义为获得性无助，该方法从20世纪60年代提出至今仍被广泛应用。
实验装置
1. 硬件装置
获得性无助图像实时监测分析系统与穿梭基本相同。采用二级测控模式，下位机由测试箱、摄像头、刺激信号和电网组成，上位机由PC机、打印机等组成。
(1)测试箱 测试箱一般为矩形或方形，分A 、B两室，两室面积等大，不同文献中所用 测试箱在材料、尺寸、形状和颜色等方面存在一定差异。但两室内径的基本参数(长×宽× 高)一般为：大鼠30cm×30cm×50cm; 小鼠20cm×15cm×40cm 。A 、B 两室间有一椭圆形小孔(直径×高)为：大鼠7cm×9cm; 小鼠3cm×5cm。
(2)电网 采用不锈钢电网。大鼠电网的每根电丝直径0.3cm, 电网间距1.5cm; 小鼠电网的每根电丝直径0.2cm, 电网间距1.0cm 。
正华生物ZH-XWZ获得性无助实验装置2. 软件系统
采用KSYY-WZ计算机图像实时分析系 统，实时追踪和记录实验动物(大、小鼠) 的位置，对动物在测试箱的状态进行实时 识别、采集、分析处理和自动保存，建立 包括运动/静止、次数、时间、路程和速度 四类信息的多项评价指标，结果可导入到 Excel, 并进行直方图曲线轨迹的处理，在线获取并实时分析动物精细行为活动信息。
操作步骤
1. 模型建立(1~7天)
模型建立时间无统一标准，建模1～7天均有文献报道，其中建模1～3天较为常见。建模期 将动物放入实验箱中，适应3～5min(可选)后，连续进行30～60个(可选)运行周期为1次 实验。每个周期为无信号不可逃避的双室足底电击(大鼠0.8mA; 小鼠0.25mA), 电击持续15s (10～30s), 间隔15s(2～60s)。
2. 条件性回避反应学习期(2天)
造模结束后或间歇1天进行条件性回避反应学习，每天1次。 训练时，动物放入穿梭箱中，每箱1只，适应3～5min (可选)后，连续进行30个运行周期。每个运行周期的时间为30s, 依 次为3s条件刺激(灯光刺激/声音刺激),3s条件刺激+非条件刺激(电击：大鼠0.8mA; 小鼠0.25mA) 和24s间歇期(不给予任何刺激)。
3. 条件性回避反应测试期(1天)
条件性回避反应学习结束后进行。将大鼠放入穿梭箱中，每箱1只，连续进行30个运行周 期。每个运行周期的时间为30s, 依次为3s条件刺激(灯光刺激/声音刺激),3s条件刺激+非条件刺激(电击；大鼠0.8mA; 小鼠0.25mA) 和24s间歇期(不给予任何刺激)。
评价指标
(1)逃避失败次数 动物在设定的非条件刺激持续时间内未完成回避反应的总次数。
(2)逃避潜伏期 实验开始后，动物第一次穿梭至对侧测试箱的时间。
(3)其他评价指标 主动回避次数、安全区时间(无电区域)、运动总时间(实验期间动 物处于运动状态的时间)、运动总路程(实验期间动物物理位移的总和)等实验指标也作为抑郁行为辅助评价指标。
注意事项
(1)实验中可考虑将动物足部沾湿的方法尽可能避免无效电击。
(2)行为学实验影响因素较多，过程中应尽可能避免混杂因素。对照组置于同样环境前，注意用乙醇清洁，防止因电击动物留下的气味引起正常动物的恐惧紧张心理。
(3)逃避失败次数<5次，动物可剔除。
讨论和小结
获得性无助实验可模拟快感缺乏、对奖赏反应能力下降等，除作为经典的抑郁行为实验外，还是一种理想的抑郁模型。获得性无助用于抑郁行为评价的方法小结如下：
(1)测试箱的尺寸可在文中示例增减幅度±15%。
(2)刺激参数。采用不锈钢电网，增减幅度±10%。电刺激参数为频率：5～15Hz, 刺激强
度(电压):30～80V, 刺激时间：0～999s。
(3)逃避失败次数和潜伏期时间是获得性无助实验的经典指标，在一个周期(每30次电击 为一个周期),动物逃避失败次数大于25次或者与对照组相比有显著性降低 (P<0.05),可表示 动物出现抑郁行为；逃避潜伏期与动物的抑郁程度成正比，逃避潜伏期大于15s或者与对照组相 比有显著性降低(P<0.05)。判断标准一般采用组间比较，如经典评价指标中的任一指标统计学上有显著性差异(P<0.05),其余指标发生同向性改变，则视为获得性无助评价抑郁情绪有改变。
(4)获得性无助模型的缺点是在不接受连续的不可逃避电击后，所有抑郁学特征不能持续 太长时间，因此，建模周期的选择是获得性无助模型成功的关键。获得性无助模型建立期则为 1～7天，其中建模1～3天最为常见，推荐2～3天建模时间。停止不可逃避电击后，动物抑郁行为表现一般维持在7天左右。
(5)条件性回避反应检测中，动物可通过穿梭、压杆或转轮三种行为操作以逃避惩罚性刺 激，这三种方法均适用于大鼠，而对于小鼠实验，穿梭逃避实验更适用。并且，穿梭实验采集 的逃避失败次数和逃避潜伏期等指标与另两种方法相比采集的延迟反应时间具有更好的准确性、可靠性和重复性，故穿梭逃避对于获得性无助实验来说更为可靠、适用。