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场景恐惧实验分析系统,手把手教学场景恐惧实验方法步骤

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场景恐惧

场景恐惧 (contextual fear) 是一种条件性恐惧,是基于巴普洛夫条件反射而建立 的,通过训练将场景这一条件性刺激与厌恶性非条件刺激建立起条件反射。最常用的程序是由LeDoux及其团队和Fansclow及其团队设计的。将动物置于恐惧箱中,之后对 动物进行足部电击,经过多次将场景——恐惧箱(条件刺激)与足部电击(非条件刺激)进行配对,动物会形成电击和周围环境(恐惧箱)之间的条件反射,再次给予动物条件性刺激(将动物放入电击箱环境)时,即使不给予电击(非条件刺激),动物也会表现出僵住反应。

实验装置

实验装置主要包括条件性恐惧箱、隔音箱、场景箱、自动录像装置及分析软件等。

(1)条件性恐惧箱 包括与箱底格栅地板相连的电击发生器(可产生0.1~1.0mA 的各种强度的电击)、声音发生器(可产生宽频的咔嗒声或低频音),并与计算机相连。

(2)隔音箱 装有一灯、 一小风扇(用于通风和产生背景音)以及一个与声音发生器相联的扩音器。有些隔音箱门上有一猫眼,用于观察操作箱内的动物。

(3)场景箱 通常由透明有机玻璃制成,有可移动的格栅式地板和纱窗式顶部。为防止 动物滑至格栅下面,格栅条之间距离应足够短。对于小鼠和年幼大鼠,关联条件箱通常为 26cm×21cm×10cm; 格栅地板由不锈钢条(直径1.5mm, 中央间距小鼠为0.5cm, 年幼大鼠为 1.2cm) 组成。对于成年大鼠,关联箱通常为23.5cm×29cm×19.5cm, 格栅地板包括16根不锈 钢条(直径2.5cm, 中央间距为1.25cm)。

(4)自动录像装置及分析软件 最初的实验通过人工计数僵住时间,现在可以通过专业软 件,自动记录并分析实验动物的僵住时间以及僵住次数。此外,还有电压计和声强计,用来检测刺激强度。

ZH-KJ型场景恐惧实验系统

场景恐惧实验系统(FCS)用于小型啮齿类动物(大、小鼠)环境相关条件性恐惧实验研究。啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态(immobility),动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。抗抑郁药和抗中枢兴奋药可以明显缩短不动状态持续的时间。实验过程中,实验对象被给与一个声音信号(条件刺激),随后给予电击(非条件)刺激。该训练称为条件性训练,训练结束后实验动物进行声音信号或环境联系性实验。一般情况下啮齿类动物对相应的环境和不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应,如静止不动。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。

软件平台特性

l 系统最多可以同时跟踪、记录和分析 16 只动物的行为状态

l 系统可支持声、光信号作为线索信号,按照实验规范,自动完成实验所需的声光电等各种信号控制

l 系统采用先进的图像处理算法,将被测动物的形状变化以及其它因素综合处理,得到的因子作为判决条件,同时还设有电栅栏消除功能,其稳定性和可靠性是通常采用重心跟踪算法和帧间差算法所无法匹敌的

l 条件性恐惧的实验方案为可视化设计,采用图形化方式进行显示,简便直观,并可保存多个实验方案,使得在后续实验中选择和重复使用

l 系统具有强大的数据分析和处理方式,既可以按照刺激发生的事件关系进行分析,也可以按照时间进行分段分析,数据可以导出到Excel中进行二次分析

l 支持使用摄像头进行实时跟踪,也支持使用事先录制好的视频文件进行离线跟踪,分辨率可达到640×480

l 在使用摄像头进行实时跟踪的同时,可以进行实况录像

l 独创的事件关系图功能,能够使实验人员更好地将外界刺激与动物的行为关联起来

l 系统的分析指标丰富多样,不仅记录分析Freezing指标,同时还记录分析Immobiity和Mobility指标

正华生物,ZH-KJ型场景恐惧实验系统,Ο561联6Ο62系3Ο7我

操作步骤

实验方法参考张黎明等文献,操作流程见图。

训练阶段:共分为2天。第1天,将小鼠放入条件性恐惧箱中适应5min, 之后每只小鼠都将受到由不锈钢栅栏传输的15次间断的、不可逃避的足底电击(电流:0.8mA, 持续:10s,间隔:10s), 共计5min。 对照组小鼠放入同一装置10min, 但不给予电击。训练第2天的程序与第1天相同。

测试阶段:在第3天(可根据实验设计进行调整,建议不超过2周)进行小鼠的场景恐惧测 试,注意测试用场景、运行程序与训练当日相同。将小鼠重新置入第1、2天训练阶段的条件性 恐惧箱内5min, 但不给予任何电击处理,测试5min内的僵住时间,以期评价环境相关的条件性恐惧。

评价指标

实验结束后通过软件分析系统对记录的数据进行分析,评价指标为:僵住时间百分率=僵 住时间(s)/ 总时间(s)×100%, 僵住时间百分率一般与动物恐惧样行为成正相关。消除恐惧的药物可以降低僵住行为。

注意事项

(1)要使动物在场景测试中表现僵住行为,必须让其在场景箱内有适当的时间。应避免将动物放入箱内便立即给予电刺激,因为这样动物没有时间在电击与箱内场景之间形成联系。

(2)训练及测试时需保持周围安静,尤其注意正在进行实验的动物和等待进行实验的动物不能发在同一房间之内,不能让其他实验动物听到接受电击刺激实验动物的叫声,因为这也可 能会对实验动物产生恐惧反应。

(3)每次测试时,若同时测试多只动物,应注意随机选取不同组别的动物进行检测,避免不同时段动物活动度不同对实验结果的影响。

讨论和小结

场景恐惧实验常用于研究动物恐惧的行为模式,在解析恐惧的神经调控机制研究领域发挥了重要作用。场景恐惧实验方法要点如下:

(1)每次造模后清理排泄物并用30%酒精(或4%醋酸)擦拭不锈钢栅栏和托盘,避免气味对后续小鼠的恐惧记忆产生影响。

(2)在场景恐惧测试时,仍然使用与训练时相同的恐惧箱,依次检测实验动物对场景提示 的恐惧记忆的表现。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行,可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。

(3)大鼠和小鼠都被广泛用于条件性恐惧模型,其实验方案非常相似。差异在于刺激强度和恐惧箱的大小。实验组的规模与其他实验规模相似,通常需要8~12只/组,才能获得统计学意义。

(4)即使是动物居住条件的短期变化也可能产生很大影响,在训练和测试期间,不要更换垫料,动物回到新环境会影响对环境的学习。

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